本院覽號:13T-880205
創作人:鍾邦柱 、胡孟君
智財權:專門技術
摘要:
類固醇荷爾蒙由膽固醇衍生而成。負責催化類固醇合成的第一個反應酵素為 P450scc,其基因命名為 CYP11A1。CYP11A1 基因的表現具有組織專一性,主要表現在類固醇生成組織如腎上腺、性腺和胎盤,以及腦的一部份組織。本論文主要是想知道如何讓外來基因在類固醇生成組織表現,以做為未來基因治療的基礎。利用細胞培養技術,已知調控 CYP11A1 基因表現的 5'-端 DNA 序列皆位於 2kb 以內,為了瞭解其在生物體內的表現, 將 5'-端 的 4.4kb DNA 序列連接報導基因 LacZ 以產生轉殖小鼠。結果一共得到十六株轉殖小鼠,四株 (#13, #76, #78 and #88) 偵測到有 LacZ 基因的表現。除了 #13 有外源基因重組外,其他三株的 LacZ 基因表現在類固醇生成組織腎上腺和性腺,但不在其他非類固醇生成組織中表現。經由組織切片得以說明,LacZ 基因在腎上腺和性腺表現的位置與內源CYP11A1 基因相符,其中睪丸的產量較低,不易偵測。另外還觀察到,LacZ 基因在轉殖小鼠的表現可能與其嵌入套數有關,套數越高表現越差。LacZ 基因的表現還有性別差異的存在,雌性較雄性為好。胚胎時期的腎上現有很好的 LacZ 基因表現,並且在 11.5 天即可偵測到,與 CYP11A1 基因開始有表現的時期類似。這些結果顯示 5'-端的 4.4kb DNA 序列可以調控 CYP11A1 基因組織專一性的表現,亦可以調控胚胎時期 CYP11A1 基因在腎上現的表現。
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